（更正一下：之前的流速設置有問題，現改為30毫升每分鐘，而不是1毫升每分鐘，實驗室采用的是高壓液相色譜。）
幾分鐘後，流動相運行平穩，進出矽膠柱的細管中充滿了液體，不再存在氣泡。
目前樣品柱中的樣品巋然不動，並沒有在溶劑的裹挾下向下移動，這是因為當前的溶劑為純石油醚，極性非常小。
許秋打開紫外檢測器，設置5分鐘後A：B的體積比為90:10，也就是緩慢增大流動相的極性。
流動相的極性不能貿然的迅速提升，因為儀器隻能控製當下抽取溶劑的比例。
換言之，儀器對流動相溶劑比例的控製是滯後的，矽膠柱中實際流動相的溶劑比例可能是十幾秒、幾十秒前的比例。
而液相色譜分離、提純的原理，主要是利用不同分子結構的物質，在色譜柱中移動所需的溶劑極性的臨界值不同。
也就是說，一旦流動相的極性過高，同時達到多種組分的臨界值，導致這些組分沒有被徹底分開，同時隨著流動相向下移動，再同時被收集，就意味著實驗失敗。
那麼就要重新拌樣、旋蒸、填柱子、過柱子了。
這台液相色譜儀同時隻能處理一根柱子，所以許秋在操作的時候，韓嘉瑩去把另外兩個樣品填入小樣品柱，完成裝樣。
之後她沒事可做，便搬了個圓凳坐在他旁邊圍觀。
隨著時間的推移，A、B溶劑中B的體積分數緩慢提升。
“師兄，還沒反應啊，二氯甲烷都20%多了，還一動不動的。”
“這說明極性還是不到位，慢慢升吧。”
“感覺過柱子好費溶液呀。”看著旁邊溶劑桶的液麵已經微微下降，韓嘉瑩吐槽了一句。
“是啊，而且是帶有反應產物的混合溶劑，想重複利用也比較麻煩，最多用來洗一洗瓶子，”許秋笑了笑，“不過二氯甲烷和石油醚，每種都訂了四桶?乙酸乙酯訂了兩桶?肯定是夠用了一段時間了。”
又過了一會兒，當軟件上實時顯示著當前B%為32%時?空白矽膠柱中終於出現了一抹紅色?紫外檢測器中也出現了明顯的信號。
“動了，它動了。”
“嗯?準備乾活。”許秋將B%維持在30%。
矽膠柱中，那一抹紅色慢慢的變為一團紅色?接著又變為一條紅色。
當紅色的頭部到達空白色譜柱的下端後?許秋將收集模式從廢液模式改為工作模式。
淡紅色的溶液隨著一根針頭噴射入試管架上的1號試管中。
十幾秒後，1號試管裝滿，針頭自動移動至2號試管的位置，繼續噴射……
許秋也沒閒著?他用毛細管蘸取了少量1號試管中的溶液?然後用石油醚：二氯甲烷1:1配比進行點板。
他對比了此次點板的結果和上午的結果。“隻有一個樣品點，而且還很淺，從位置來看，是那個主要產物的。”
韓嘉瑩則指了指上方的針頭。“這邊溶液噴的好快，感覺沒過多長時間?一跟試管就裝滿了。”
“我們用的是高壓液相色譜，流速是30毫升每分鐘?換算一下，一個試管的容積大約10毫升?差不多一分鐘四管左右吧，而普通的液相色譜通常僅為1毫升每分鐘?效率差了幾十倍。”許秋笑了笑道：
“現在的壓力隻有30多個大氣壓?這台儀器的最大承載壓力可達100大氣壓?對應的極限流速大概在60毫升每分鐘。”
“差距這麼誇張呀，”韓嘉瑩疑惑道：“那這樣的話，不會降低分離效果嗎？”
“因為我們隻有兩個樣品點，而且它們的分離程度比較高，所以並不用擔心這個問題。”許秋解釋道：“之後如果涉及比較難以分離的樣品，可以適當的降低流速，提高分離效果。”
……
隨著溶液繼續噴射，後麵試管中液體的顏色也越來越紅。
第一次實操，許秋比較謹慎，每隔五個試管點一次板，判斷試管中的組分是否純淨。
幸運的是，均隻有一個樣品點，而且在矽膠板上的爬升位置也都一致，表明是同一種產物。
二十多分鐘後。
“師兄，我們的試管快用完了。”韓嘉瑩指了指試管架，現在已經運行到第97號試管了。
“等下先把另外一組乾淨的試管換上吧。”許秋也是頭疼，此時矽膠柱中的那一條紅色還沒有完全消失的跡象，再來100根試管都不一定夠用。
待第100號試管被裝滿，許秋將儀器暫停，然後把試管架連同上麵的試管轉移到旁邊的通風櫥中，用鋁箔紙蓋上，接著又取來另外裝有100根新試管的試管架，繼續收集。
“要不要我再去樣品倉庫領用一些試管。”韓嘉瑩主動提議，之前他們隻領用了300隻試管，本以為夠用了，結果現在看來過一次柱子都不一定夠用，雖說可以洗淨重複利用，但勢必會大幅拖慢實驗速度。
“確實是個問題，讓我想想……”許秋目光遊動，液相色譜儀、試管架、韓嘉瑩、溶劑桶、廢液桶，他突然眼前一亮，“有了，我們可以利用廢液管，直接收集溶液，用一次性PE杯代替試管。”
“這個方法好呀，”韓嘉瑩連連點頭，“一個PE杯的容量相當於二十隻普通試管了，而且用完還不需要清洗。”
“優點確實顯而易見，不過風險也大，萬一混入了一點點其他組分，那麼整杯溶液都要重新分離。”許秋笑了笑道：
“當然我們也不能因噎廢食，還是先把這個方法應用起來。”
“好，我去找PE杯。”
許秋則再次暫停儀器，將廢液管從廢液桶中取出來，並在通風櫥中用二氯甲烷溶劑將其衝洗乾淨，然後用鐵架台、長尾夾簡單搭建了一個溶液收集裝置，把學妹取來的PE杯放在裝置的正下方。
繼續收集，切換為廢液模式。
又過了三十多分鐘，一共收集了七杯溶液，每一杯溶液許秋都點板檢測了，成分都是單一產物。
此時，空白矽膠柱中的那一條紅色基本消失，噴射出的溶液基本恢複無色透明。
許秋將廢液管重新插回廢液桶，朝學妹問道：“你說我們還要不要收集第二種產物了？”
“唔……”韓嘉瑩想了想道：“還是收集吧，這是我們第一次過柱子，完美一點也能多增加些經驗，萬一主要產物還在柱子裡呢。”
許秋被逗笑了，“這100根試管，七個杯子也能是副產物？”
“嘿嘿，以防萬一嘛。”
“行，聽你的。”許秋也沒堅持，反正一個多小時都做了，也不在乎再加個鐘。